凝集素应用手册 ( 免疫组化IHC )
数百年来，在想要观察细胞和组织的结构时，可以与各种染色剂或染料结合使用的显微镜技术一直是科学家们的首选方案。将酶联抗体引入该系统后，特定蛋白质的位置就可以覆盖在组织学图像之上。现如今，Vectorlabs提供了一个与IHC检测系统相容的凝集素和凝集素偶联物产品库，可协助对糖链结构感兴趣的科学家们进一步的开展他们的一系列研究。这些凝集素产品有助于研究流感病毒与人或动物组织的结合(Ref. 12和31)，还可以用于癌症预测和诊断 (Ref. 42)，以及作为病原体感染的标记物(Ref. 26和43)。当然，这些还只是所有应用中的少数几个例子。
凝集素与福尔马林固定的石蜡切片(FFPE)和冰冻切片都兼容，不过在FFPE制备过程中会损失一些表位(粘蛋白、糖脂)，因此这两个系统可能无法产生相同的结果(Ref.69)。
关于IHC，如果想了解更多，可以参考Vectorlabs的免疫组化(IHC)指导手册。
精选文献
• Cancer diagnostic and/or prognostic (Ref. 42)
• Detection of pathogens (Ref. 43)
• Tissue epitope mapping for interaction studies (Ref. 31)
• Glycan alterations in pathological processes (Ref. 36)
实验流程概览
更详细的凝集素-IHC应用方法，可参考Ref. 42
样本准备
• 使用Vectorlabs的ImmEdge 免疫组化笔(H-4000)隔离样本以减少试剂的使用。
抗原修复
• 根据实际情况，选择合适的基于pH或酶的抗原修复条件。
封闭
• 使用Vectorlabs的Carbo-Free™ Blocking (CFB*, SP-5040-125)室温下孵育样本30分钟。
Note：与其他常见的含蛋白质的封闭剂，如血清、脱脂奶粉或酪蛋白不同；CFB不含糖蛋白。
检测
• 加生物素标记的凝集素，室温孵育1小时（或在4°C条件下孵育过夜）。建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml，具体浓度需要用户进行优化；
• 使用TBS清洗载玻片, 5min/次，共3次；
• 加链霉亲和素-酶结合物或VECTASTAIN®ABC酶试剂，室温孵育30分钟；
• 使用TBS清洗载玻片, 5min/次，共3次。
显色
• 使用合适的酶底物，进行相关显色流程；
• 封片，观察。
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