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凝集素应用手册 (Western Blotting- 化学发光法)

发布日期:2025-01-21
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当分离、鉴定或研究糖蛋白时,蛋白质印迹(Western Blotting)是一种可供选择的分析技术。通过电泳将蛋白质按大小不同的分子量进行分离,然后转移到膜上进行分析。这种方法保留了蛋白质的糖基化修饰,可以通过凝集素来检测。检测方法因具体应用而异。在此,我们介绍一种使用基于酶显色的化学发光法。


通常情况下,电泳迁移检测是进行糖基化修饰蛋白的首选方法,但是用凝集素进行检测可以得到更精确的糖谱。尤其是Vectorlabs可提供多种凝集素筛选试剂盒用于糖蛋白研究(具体产品可参见第38页)。


 精选文献 

• Whole sample protein glycosylation analysis (Ref. 47)

• Determine glycosylation of specific protein(s) (Ref. 30)

• Track glycosylation changes across physiological events (Ref. 28)


 实验流程概览 

样本制备

• 按照实验室常规Western Blotting流程制备样本;

• 电泳、转膜。

封闭

• 使用Vectorlabs的CFB溶液(Carbo-Free™ Blocking,SP-5040-125),室温孵育膜30-60分钟。

检测

• 加入生物素标记的凝集素,室温孵育一小时。建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml,具体浓度需要用户进行优化;

• TBST室温洗膜 5–10 分钟,4次。

显色

• 加入酶标记的链霉亲和素或VECTASTAIN ABC 试剂室温孵育一小时。Vector Laboratories可提供多种不同的HRP 及AP 相关试剂;

• TBST室温洗膜 5–10 分钟,4次;

• 根据需求加入合适的酶底物进行显色。

信号收集

图像采集。


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