凝集素应用手册 (Western Blotting- 化学发光法)
通常情况下,电泳迁移检测是进行糖基化修饰蛋白的首选方法,但是用凝集素进行检测可以得到更精确的糖谱。尤其是Vectorlabs可提供多种凝集素筛选试剂盒用于糖蛋白研究(具体产品可参见第38页)。
精选文献
• Whole sample protein glycosylation analysis (Ref. 47)
• Determine glycosylation of specific protein(s) (Ref. 30)
• Track glycosylation changes across physiological events (Ref. 28)
实验流程概览
样本制备
• 按照实验室常规Western Blotting流程制备样本;
• 电泳、转膜。
封闭
• 使用Vectorlabs的CFB溶液(Carbo-Free™ Blocking,SP-5040-125),室温孵育膜30-60分钟。
检测
• 加入生物素标记的凝集素,室温孵育一小时。建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml,具体浓度需要用户进行优化;
• TBST室温洗膜 5–10 分钟,4次。
显色
• 加入酶标记的链霉亲和素或VECTASTAIN ABC 试剂室温孵育一小时。Vector Laboratories可提供多种不同的HRP 及AP 相关试剂;
• TBST室温洗膜 5–10 分钟,4次;
• 根据需求加入合适的酶底物进行显色。
信号收集
• 图像采集。
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