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DC-CIK 细胞的制备方法

CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写,中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。CIK 是单个核细胞在CD3 单抗和多种细胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群.


DC 是“Dendritic Cells”的缩写,中文全称为“树突状细胞”,因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。


DC-CIK 即DC 和CIK 细胞在体外共培养,然后回输给患者。严格的说,最终的效应细胞是经DC 体外活化的CIK 细胞。多项研究表明,DC 与CIK 具有协同作用,共同孵育后,DC 表面共刺激分子的表达及抗原递呈能力均明显提高,而CIK 的增殖能力和体内外细胞毒活性也得以增强,因此DC-CIK 较单独的CIK 治疗更为有效。

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小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养

虽然DC 存在于体内多种组织中,但含量很少,无法满足科学研究和临床治疗的需要,所以人们尝试多种方法来体外培养和扩增DC。对于人,最常用的方法是从人外周血单个核细胞(PBMC)诱导DC 的产生。而对于小鼠,最常见的方法是从骨髓细胞诱导产生DC,即骨髓来源的DC(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDC)。

本文主要介绍三种经典的诱导BMDC的方法:

【经典的BMDC 培养法】-Inaba 法(改良)

【BMDC 大量制备法】-Son 法

【BMDC 大量制备法】-Lutz 法






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DC细胞的制备方法

DC 需从其它种类细胞诱导分化而来,且可分为不同的成熟阶段,所以通常分为2个步骤进行培养:

Step 1:从DC 的祖细胞(如单核细胞)诱导分化为未成熟DC (immature DC,iDC);
1. 血细胞分离机或Ficoll分离外周血PBMC
2. 贴壁法获得单核细胞
3. 加入GM-CSF (500-1,000U/ml)和IL-4 (500U/ml)


Step 2:从iDC 诱导分化为成熟DC (mature DC,mDC)。
加入:1. TNF-alpha(10ng/ml) 2. IL-1beta (10ng/ml) 3. IL-6 (1000 U/ml) 4. PGE2 (1ug/ml)


获得DC细胞

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