凝集素应用手册 ( 流式细胞术 FC )
细胞分析
流式细胞仪是一种多功能平台，可进行单靶标或多靶标分析，可用于识别和比较不同细胞群之间的标志物。使用这项技术，可以监测单个标记细胞的荧光特性。当细胞与结合了荧光素的抗体或凝集素一起孵育时，可对不同细胞亚型的进行区分。
几种凝集素组合使用是监测细胞糖基化状态的极好工具。糖基化是细胞表面蛋白质的一种特征显著的翻译后修饰，利用凝集素对不同细胞群体之间糖基化状态进行区分是一种有效的策略。它已被用来证明糖基化修饰的改变是癌症的典型特征(Ref. 70)，并可用于肿瘤诊断(Ref.71、72)。细胞表面糖基化也可以用来指示细胞表型，例如血小板循环半衰期(Ref.73)。
精选文献
• Differentiation of hematopoietic stem and progenitor cell stages (Ref. 50)
• Interrogation of cell surface receptor glycosylation(Ref. 17)
• Immune cell surface phenotyping (Ref. 37)
• Mutant cell line screening (Ref. 54)
实验流程概览 (参考Ref. 4).
样本制备
• 制备单细胞悬液，包括相关固定和通透步骤，以及红细胞裂解。
封闭
• 可使用Vectorlabs的Carbo-Free™ Blocking (CFB*，SP-5040-125)为封闭剂及稀释液（如果需要）。
检测
• 将细胞与荧光标记凝集素4°C孵育1小时。建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml，具体浓度需要用户进行优化；
- 生物素标记的凝集素也被广泛用于流式检测，其需要与链霉亲和素-荧光素结合物联合使用，可见随附的参考文献和图片；
• 用预冷的PBS清洗细胞，两次 (x2)。
显色
• 如果使用的是生物素标记的凝集素，此步需要将细胞与链霉亲和素-荧光素结合物在4°C孵育1小时；
• 用预冷的PBS清洗细胞，两次 (x2)；
• 用PBS将细胞重悬至合适的浓度。
上机检测
• 采集每个样本的信号进行分析。
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