凝集素应用手册 ( 细胞分选 )
流式细胞分选技术可以根据细胞表面标记物对细胞群,甚至单细胞进行分离。通过使用不同的荧光基团对细胞群进行染色,可以识别并分离出独特的细胞亚群。无论是单细胞还是细胞群,当检测到所需的细胞,随后将其转移到合适的容器中,就实现了细胞分选。例如,血液淋巴细胞可以明显分为FITC-CD4+和PE-CD8+群体。将凝集素应用于流式细胞分选,可以产生新的标记物组合,从而可进一步对细胞群进行划分,通过这些标记物组合可以鉴定人神经祖细胞(Ref.45)。在细胞分选策略中使用凝集素也可能使稀有细胞群体得到更大的富集(Ref.15)。此外,凝集素还可用于区分细胞亚群,是一种有用的克隆选择策略(Ref.8)。
精选文献
• Identification and characterization of novel cell types (Ref. 8)
• Enrichment of rare cell types (Ref. 15)
• Clonal selection of population (Ref. 49)
实验流程概览 (参考Ref. 4).
样本制备
• 制备单细胞悬液。
封闭
• 可使用Vectorlabs的Carbo-Free™ Blocking (CFB*, SP-5040-125)为封闭剂及稀释液(如果需要)。
检测
• 将细胞与荧光标记凝集素4°C孵育30-60mins, 建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml,具体浓度需要用户进行优化;
• 用预冷的PBS清洗细胞, 两次(x2);
• 将细胞与不同荧光素标记的一抗在4°C孵育30-60分钟,进行进一步分选(如果需要);
• 用预冷的PBS清洗细胞, 两次(x2)。
上机检测
• 采集每个样本的信号进行细胞分选。
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