凝集素应用手册 (亲和层析 )
亲和层析—柱式(Column)或批量(Batch)
亲和层析是一种分离技术，通过与固相基质的特异性相互作用来分离目标分子。正向选择时，感兴趣的目的分子会结合到色谱柱上，而其他分子则会被洗去。结合的分子可以从柱上洗脱后被回收。而在负向选择过程中，感兴趣的分子会流经色谱柱，而其他分子被保留下来。利用这项技术，可富集或纯化特定的糖蛋白，例如分离IgG的特定糖基化变体，或分离样品中糖基化和非糖基化的蛋白质。
目前已知有一些凝集素具有病毒结合或抗病毒特性。Pauthner等人利用GNL的HIV结合能力来纯化模拟gp120的合成糖肽，以便用于免疫和诱导HIV中和抗体(Ref.10)。其他病毒家族也可能是凝集素的靶标，如Con A、LCA和PNA都被证明会影响流感病毒的复制(Ref.74).关于凝集素抗病毒特性的全面综述，可参阅Mitchell等人的文章Ref.75。
凝集素用于亲和层析的精选文献：
• Purification of glycopeptides for vaccine development (Ref.10)
• Enrichment for proteins with specific glycosylation patterns after media supplementation or knock-down treatment (Refs. 11 and 17)
• IgG enrichment for the protein fraction that contain sialic acid (Ref. 51)
• Identification of proteins that carry glycans of interest (Ref. 20)
实验流程概览 (参考Ref. 4).
样本制备
• 将琼脂糖-凝集素移至适用的柱子(即倒置巴斯德移液管或其他商业化柱子)或培养皿中（根据实际应用需求）；
• 使用前, 用缓冲液彻底清洗琼脂糖凝集素树脂, 以去除防腐剂和稳定剂；
• 添加 0.1mM Ca2+ 和0.01mM Mn2+的洗涤缓冲液可提高某些凝集素的性能。
样本与琼脂糖-凝集素共孵育
For Batch
• 在室温下，将样本与琼脂糖-凝集素珠摇匀孵育2-4小时。或 4°C 条件下过夜孵育；
• 低速离心(<1,000g),去除上清液；
• 用缓冲液清洗3次；
• 用2倍琼脂糖珠体积的适当洗脱液孵育凝集素柱；
• 低速离心(<1,000g)并去除上清液。
For Column
• 利用重力拉动糖蛋白样品缓慢通过色谱柱；额外添加压力会压缩珠子并减少珠子与目标物的结合；可以根据样品要求，采用室温或低温条件；
• 用2-3倍柱体积的缓冲液清洗柱子，以去除未结合的物质；
• 可能需要几倍柱体积的洗脱液来获得足够的回收率；
• 清洗、回收柱子。
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